Variabilidad Genética del Virus del Papiloma tipo 16 en mujeres con lesiones cervicales de la región Litoral del Ecuador.

Director de proyecto: Dr. César Humberto Bedoya Pilozo

Contacto: cbedoya@inspi.gob.ec

Generalidades del virus del papiloma humano (HPV)

Los papilomavirus o virus de papiloma humano (VPHs) pertenecen a la familia Papilomaviridae que se divide en 16 géneros de los cuales solo 5 afectan alser humano. Son mucosatrópicos, es decir presentan alto tropismo por la piel y mucosas. (Davy & Doorbar, 2005).

Son virus desnudos icosaédricos de tamaño pequeño (55 nm de diámetro); su composición consiste en 90% de proteínas y 10% de DNA bicatenariocircular, del cual solo una cadena es codificante (Carreras et al, 2007).El DNA de los papilomavirus contiene 8000 pares de base (bp) y comparten una estructura genética común que codifica alrededor de ocho marcos delectura abiertos (ORFs), que se pueden dividir en tres partes funcionales: 1) una región temprana (early, [E] que codifica las proteínas reguladoras E1, E2,E4, E5, y E7, necesarias para la replicación viral; 2 una región tardía (late, [L]) que se expresará como las proteínas estructurales L1 y L2, necesarias para elensamblaje del virus y; 3) una tercera región no codificadora que regula la replicación viral y la expresión génica, conocida como región larga de control(LCR).

Los factores que reconocen el origen de replicación son las proteínas E1 y E2, la última ademáses la principal proteína reguladora de la transcripción viral. E4 y E5 son proteínas que participan en la fase tardía de la infección. E6 y E7 son proteínas oncogénicas que participan en la transformación de las célulasa través de la inhibición de las proteínas anti­tumorales P53 y retinoblastoma.Las dos proteínas de la cápside codificadas por la región tardía son la proteína late (L)1, que constituye 80% de las proteínas totales virales y L2.

Existen actualmente más de 300 tipos de VPH, cuya clasificación está basada en la secuenciación del gen estructural L1 mediante técnicas moleculares.Una diferencia mayor a 50% constituye un nuevo tipo viral. Además, de acuerdo con su patogenia oncológica se clasifican en tipos de bajo riesgo y altoriesgo oncológico debido a su asociación con lesiones proliferativas benignas (condilomas o verrugas) o malignas como los carcinomas epidermoides (zurHausen, 2009).Las infecciones con tipos de alto grado de riesgo oncogénico que se transmiten por contacto genital son el VPH 16, 18 o el 31; en Estados Unidos la mayoría de casos de cáncer cervical están relacionados con los serotipos VPH16 y VPH18, pues estos genotipos inducen transformación celular. Sinembargo esta transformación puede ser benigna como maligna y está relacionada con los tipos antes mencionados. Otros tipos con alto riesgo oncogénico son el VPH 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68 (García­Espinosa et al, 2012)

Los procesos por el cual se induce la transformación celular en neoplasias malignas inicia con laintegración del genoma viral con el genoma celular en regiones cercanas a los “sitios frágiles” en los cromosomas, esto se produce por mecanismos aún desconocidos.

No obstante, el gen que media inserción es el gen E2, que una vez integrado, sufre deleciones que lo inactivan, la expresión de los genes virales E5, E6 y E7, cuya expresión normalmente está inhibida por el gen E2 (Bosch et al, 2002). Finalmente, la falta de regulación de la expresión de estos genes el epitelio cervicalpermite que se comporten como oncogenes. Es por esta causa que el VPH se encuentra en 99.7% de los casos de cáncer cervicouterino a nivel mundial.

Específicamente, E6 se unirá a la proteína p53 para degradarla por la vía ubiquitina­proteosoma, mientras que E7 se unirá a la proteína pRB inhibiendo sufunción.  Como consecuencia, con ladestrucción de p53 aumenta la cantidad de DNA mutado dentro de la célula. Además, existe una activación de latelomerasa, que impide la apoptosis de la célula y con la evasión de los controles del ciclo celular esta célula entra permanentemente en el ciclo celular.El espectro de anormalidades de las células epiteliales cervicales (displasia cervical) que se consideran precursoras del cáncer cervicouterino se denominan lesiones escamosas intraepiteliales (LIE). En caso de transformación maligna, se usa el término Neoplasia Intraepitelial Cervical (NIC) con tres grados deprogresión en el cual el grado 3 indica displasia grave.

Métodos de genotipificación de HPV

Los métodos de detección se dividen en dos grupos: sin amplificación como los test directos deácidos nucleicos y aquellos con amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa o PCR. Estas pruebas no solo detectan la presencia del virus sino también el tipo de HPV analizado así como susvariantes (González, 2006).

El PCR en tiempo real (RT­PCR) es una técnica confiable, sensible y específica para la detección y genotipificación en muestras de especímenes o muestrascelulares (Abreu et al, 2012). Las ventajas de este método es 1) capacidad para determinar carga viral; 2) amplificación de múltiples DNA diana con el usode diferentes fluorocromos; 3) se puede detectar ácidos nucleicos sin necesidad de grandes concentraciones. (Tucker et al, 2009)